Sekėjai

Ieškoti šiame dienoraštyje

2021 m. liepos 30 d., penktadienis

Kaip nemokamai surasti polimerazinės grandininės reakcijos (PGR) praimerius?

 PGR eksponentiškai padaugina turimą nukleininės rūgšties gabaliuką iki tokio kiekio, kad jį galima pamatuoti, nors pradžioje to gabaliuko galėjo būti visai nedaug. Tuo pagrįstas šio metodo ypatingai geras jautrumas.

Praimeriai sintezuojami už nedidelę kaina, todėl šis analitinis metodas yra vienas iš pigiausių. Jei į jūsų maistą primaišė pigios žuvies ar pigios mėsos, tai šiuo metodu galima, palyginti, pigiai ir greitai tą faktą aptikti. Jei praimerių sekos neprieinamos, galima pačiam nemokamai juos sukurti.

Galite surasti dominantį geną duomenų bazėje „NCBI Gene“. Paimti iš ten Accession ir pernešti šį skaičių į „Primer-BLAST“, randamą čia: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/. Jie suteiks numatytuosius nustatymus, kuriuos galite išbandyti. Jei dirbame su ribonukleinine rūgštimi, tai verta patikslinti, kad produktas apims egzonų sandūrą (grafoje Intron inclusion reikia pažymėti: Primer pair must be separated by at least one intron on the corresponding genomic DNA), kad DNR užteršimo problemos nekeltų rūpesčių. Galite atgauti daugybę variantų. Pirmenybę suteikiame praimeriams, gaunantiems ~ 200 bp produktą (tai galima užrašyti grafoje PCR product size: Max parašyti 200) ir turintiems minimalų nenumatytą poveikį.

Komentarų nėra: